产品货号：
KL00208
中文名称：
通用型RT-LAMP试剂盒(电泳法)
英文名称：
Universal RT-LAMP kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒含有RT-LAMP扩增所需的所有成分，可以用于RT-LAMP等温扩增。
RT-LAMP即逆转录-环介导等温扩增，它利用4条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30～60分钟完成逆转录和LAMP扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性RT-PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
保存：-20℃，有效期1年。
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RT-LAMP即逆转录-环介导等温扩增，它利用4条模板专一的特异引物、逆转录酶和具有链置换能力的Bst DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30～60分钟完成逆转录和LAMP扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于定性RT-PCR技术，同时还不需要昂贵的仪器设备。目前已成功应用于生物的快速检测，广泛用于各个领域。
- 即开即用，含有红色电泳示踪剂，扩增后可以直接上样，不需要上样液。
- 高特异性，精心优化的配方，非特异扩增比自配的试剂更低。
- 高扩增效率，一般比RT-PCR灵敏一个数量级。
- 65℃左右逆转录和等温扩增，不需要贵重仪器。
- 本试剂盒足够50次20μL体系的RT-LAMP扩增。
- 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
- 20μL体系可以加10μL的模板。
- 本制品只能用于科研，不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| RT-LAMP MasterMix(含电泳示踪剂) | 200μL |
| 逆转录酶-扩增酶混合液 | 100μL |
| 阳性对照模板-引物混合物 | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
- 制备模板RNA：用于选用合适的方法制备模板RNA。如果有N个样品，最好设置N+2个样品制备，多出的两个一个是样品制备阳性对照，一个是样品制备阴性对照。
- 配制5×RT-LAMP引物混合液。
先加超纯水将合成的HPLC级别的下列引物干粉稀释到标准所标注的母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×RT-LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×RT-LAMP引物混合液体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
注：如果没有Loop引物，则用水替代。引物名称 母液浓度 加母液量 在5×LAMP引物混合液中的浓度 FIP引物 100μM 80μL 8μM BIP引物 100μM 80μL 8μM F3引物 100μM 10μL 1μM B3引物 100μM 10μL 1μM Loop F 100μM 20μL 2μM Loop B 100μM 20μL 2μM 超纯水 780μL 终体积 1mL - 在冰上融化RT-LAMP MasterMix（待加酶），混匀，稍离心。第一次使用时，请将100μL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并轻柔混匀，然后再使用。如果有N个样品，则在N+2个反应管中加入以下组份，多出的一管是RT-LAMP扩增阳性对照（PC），一管是RT-LAMP扩增阴性对照（NC）：
注意：由于本制品含有电泳示踪剂，不宜加入可视化染料，否则会产生颜色干扰。可加入某些荧光染料，具体可以加入哪些，需要预先测试电泳示踪剂对荧光染料的影响。如果加入了荧光染料，则需要在荧光定量PCR仪上进行反应和实时检测。成分 N+2个样品管 RT-LAMP扩增PC RT-LAMP扩增NC RT-LAMP MasterMix(已加酶) 6μL 6μL 6μL 自备5×RT-LAMP引物混合液 4μL 不加 4μL 阳性对照模板-引物混合物 不加 4μL 不加 自备模板RNA 1～6μL 不加 不加 自备超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 混匀，置于65℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，严重影响反应效率。
- 扩增结束后取5～10μL扩增产物直接上样（本制品含有红色电泳示踪剂，不需要再加上样液，红色示踪剂的泳动速度相当于50bp的DNA）进行2～3%的琼脂糖凝胶电泳，有RT-LAMP扩增的样品将可见LAMP特征性DNA梯度电泳图谱（见下图）：
- 结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带，则说明RT-LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计RT-LAMP引物扩增新的靶片段。
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